免疫沉淀——質譜聯用揭示RCC2在乳腺癌MDA-MB-468細胞系中的新功能

摘要：目的分析RCC2蛋白在乳腺癌MDA-MB-468細胞系中的互作蛋白組并揭示其功能調控網絡。方法運用酶切技術結合一代測序構建攜帶Flag標簽RCC2蛋白過表達載體,慢病毒包裝感染構建Flag-RCC2過表達的MDA-MB-468穩(wěn)轉細胞株。采用Flag抗體凝膠珠親和沉淀,收集蛋白樣品進行高敏感度質譜鑒定。生物信息蛋白組學分析互作蛋白組,包括GO注釋,KEGG通路富集,構建蛋白互作網絡(PPIN)。結果高可信度164個蛋白聚類分析顯示,RCC2及其互作蛋白顯著富于核糖體相關通路中,具有RNA與核蛋白體結合能力,揭示其參與蛋白翻譯與成熟的過程。結論成功鑒定RCC2互作蛋白組,揭示RCC2在乳腺癌細胞中發(fā)揮新的翻譯調控功能。