摘要：目的建立簡便的小鼠原代視網(wǎng)膜微血管周細胞(RMPs)分離、純化、培養(yǎng)方法.方法在體視顯微鏡下機械分離獲取小鼠視網(wǎng)膜,并碎化、膠原酶消化、過濾處理,收集視網(wǎng)膜碎片,預孵24h后用接種于含有體積分數(shù)20%胎牛血清的低糖型DMEM6孔板進行培養(yǎng),并采用差異消化法純化原代RMPs.通過倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),免疫熒光法鑒定周細胞標志物,周細胞/內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)鑒定周細胞的功能.結(jié)果經(jīng)預孵的視網(wǎng)膜碎片再次孵育24h后,細胞開始從視網(wǎng)膜碎片中遷移出,逐漸增生形成大小不一的細胞集落.原代或子代細胞胞體呈不規(guī)則三角形,多個長突觸,無接觸性抑制.免疫熒光顯示第3代細胞絕大部分α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、血小板源性生長因子受體β(PDGFR-β)表達陽性,極少部分膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達陽性,vonWillebrand因子(vWF)表達陰性,RMPs純度達97%以上.體外培養(yǎng)的小鼠RMPs能被血管內(nèi)皮細胞所募集,共同形成微血管樣條索.結(jié)論本實驗成功建立了一種簡便的小鼠原代RMPs分離、純化、培養(yǎng)方法,所培養(yǎng)的小鼠原代RMPs為功能性RMPs.