水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E在昆蟲細胞中的表達、鑒定及免疫原性分析

摘要：目的:利用昆蟲-桿狀表達系統建立表達和純化分泌形式的水痘-帶狀皰疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鑒定其理化性質及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重組試劑盒快速構建重組質粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆蟲細胞中鑒定序列優化前后表達量的差異,并在High Five^TM細胞中大量表達。通過Ni-NTA親和層析方法得到高純度gE蛋白,之后通過酶聯免疫吸附試驗等驗證了其理化性質,并進行小鼠免疫分析其免疫原性。結果:構建了pFastbac-VZV gE1/2重組質粒,經過PCR及雙酶切鑒定后均為陽性克隆。使用BAC/PAC試劑盒提取Bacmid轉染sf9細胞制備桿狀病毒,經Western blot檢測,sf9細胞開始表達gE蛋白且隨著病毒代次升高gE蛋白表達量增加。序列優化后表達量明顯增加,但是大部分以胞內形式存在。通過Ni-NTA一步親和層析獲得純度較高的gE蛋白,并與VZV單抗9C8具有較好的反應性。通過免疫小鼠產生高滴度抗體,且免疫熒光結果顯示其血清可以與天然病毒上的gE抗原結合。結論:成功獲得了桿狀表達系統表達的gE蛋白并且純化和鑒定了蛋白質的性質及免疫原性,為進一步研發具有自主產權的VZV亞單位疫苗研究奠定了基礎。