水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)、鑒定及免疫原性分析

摘要：目的:利用昆蟲(chóng)-桿狀表達(dá)系統(tǒng)建立表達(dá)和純化分泌形式的水痘-帶狀皰疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鑒定其理化性質(zhì)及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重組試劑盒快速構(gòu)建重組質(zhì)粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞中鑒定序列優(yōu)化前后表達(dá)量的差異,并在High Five^TM細(xì)胞中大量表達(dá)。通過(guò)Ni-NTA親和層析方法得到高純度gE蛋白,之后通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等驗(yàn)證了其理化性質(zhì),并進(jìn)行小鼠免疫分析其免疫原性。結(jié)果:構(gòu)建了pFastbac-VZV gE1/2重組質(zhì)粒,經(jīng)過(guò)PCR及雙酶切鑒定后均為陽(yáng)性克隆。使用BAC/PAC試劑盒提取Bacmid轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞制備桿狀病毒,經(jīng)Western blot檢測(cè),sf9細(xì)胞開(kāi)始表達(dá)gE蛋白且隨著病毒代次升高gE蛋白表達(dá)量增加。序列優(yōu)化后表達(dá)量明顯增加,但是大部分以胞內(nèi)形式存在。通過(guò)Ni-NTA一步親和層析獲得純度較高的gE蛋白,并與VZV單抗9C8具有較好的反應(yīng)性。通過(guò)免疫小鼠產(chǎn)生高滴度抗體,且免疫熒光結(jié)果顯示其血清可以與天然病毒上的gE抗原結(jié)合。結(jié)論:成功獲得了桿狀表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的gE蛋白并且純化和鑒定了蛋白質(zhì)的性質(zhì)及免疫原性,為進(jìn)一步研發(fā)具有自主產(chǎn)權(quán)的VZV亞單位疫苗研究奠定了基礎(chǔ)。