表達鼠疫菌F1抗原的重組芽孢的制備及口服免疫效果觀察

摘要：目的利用枯草桿菌芽孢展示外源蛋白的呈遞技術,研究表面展示鼠疫菌保守抗原F1蛋白的重組芽孢,分析評價重組芽孢的免疫原性。方法將枯草桿菌CotB基因構建到pDG1664質粒,再將鼠疫菌保守序列F1蛋白編碼基因連接到CotB基因的下游,構建成重組質粒。然后將外源基因CotB-F1同源重組整合到PY-79枯草桿菌基因組中。經PCR、WesternBlot方法鑒定重組芽孢中鼠疫F1蛋白的表達。用上述重組芽孢以無佐劑口服方式免疫小鼠。采用ELISA方法檢測重組芽孢免疫小鼠的免疫效果。結果本研究制備出表面表達CotB-F1融合蛋白的重組枯草桿菌芽孢。用重組芽孢和野生型芽孢口服免疫BALB/c小鼠。實驗結果表明,重組芽孢免疫組產生了針對鼠疫F1抗原的特異性抗體。重組芽孢免疫小鼠能產生有效的免疫應答。結論本研究制備出表面展示鼠疫F1蛋白的枯草桿菌芽孢,建立了枯草桿菌芽孢呈遞技術方法,為發展口服鼠疫疫苗奠定了基礎。