高效液相色譜-紫外/質譜評價海洋天然產物體外抑制環氧合酶2活性方法研究

摘要：目的建立基于高效液相色譜-紫外(HPLC-UV)和高效液相色譜-多級離子阱質譜分析(HPLC-ITMS/MS)的海洋天然產物體外抑制COX-2酶的活性評價方法。方法采用Agilent Poroshell 120C18色譜柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液為高效液相色譜流動相,二元等度洗脫,流速為0.4 mL·min^-1,檢測波長210nm,進樣量10μL;質譜條件下,流動相改為乙腈-0.05%乙酸水溶液,進樣量為1μL,選用ESI離子源,負離子電離模式,噴霧氣壓35psi,干燥氣(N2)流速12L·min^-1,干燥氣溫度350℃。結果建立的高效液相色譜-紫外和高效液相色譜-多級離子阱質譜法精密度和穩定性良好,對比兩者測定酶底物花生四烯酸的適用性顯示,基于HPLC-UV的評價方法適用極性較大的天然產物粗提物;HPLC-IT-MS/MS法則因其抗干擾能力強,適用于復雜體系中極性較弱的活性物質的檢測。以建立的HPLC-UV和HPLC-IT-MS/MS方法對海洋天然產物的COX-2酶抑制活性進行評價,天然產物粗提物中黃海葵Anthopleura lanthogrammica Berkly乙醇粗提物和彎孢菌Curvularia lunata strain L2744發酵液粗提物對COX-2酶抑制作用較為明顯,抑制率分別為70.1%和25.48%。結論建立的評價方法具有適用性強、結果可靠等優點,有望為天然產物粗提物中COX-2酶抑制劑體外篩選提供技術參考。