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    化學合成多肽體外抗HBV復制的研究

    王曉芳; 范學工; 黃澤炳; 黃燕; 陳若嬋; 易盼盼; 李寧; 胡興旺 中南大學湘雅醫院感染病科/病毒性肝炎湖南省重點實驗室; 湖南長沙410008
    • 化學合成多肽
    • 乙型肝炎病毒
    • 拉米夫定

    摘要:目的觀察人工設計并化學合成的多肽在體外乙型肝炎病毒(HBV)復制模型中對HBV-DNA復制、病毒標志物表達的影響,及其細胞毒性強弱,篩選高HBV抑制且低細胞毒性的多肽,探索多肽作為新型HBV抗病毒藥物分子的潛力。方法采用傳統的甲基丙烯酸聚合物平臺設計并合成的7種多肽(KBDT-1、2、3……7,以疏水性及陽離子電親和力大小為依據),將7種化學合成多肽(10 mg/mL)、拉米夫定(1 mg/mL,陽性對照)、空白溶劑(陰性對照)作用于HepG 2.2.15細胞系,檢測化學合成多肽對HBV的抑制作用,采用結晶紫染色法檢測細胞存活率,比較各組藥物對細胞毒性的強弱。選取HBV抑制作用最強的多肽,設置10、1、0.1 mg/mL濃度梯度,分別處理HepG 2.2.15細胞3、6、9 d后,收集細胞上清液,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測病毒DNA拷貝量,化學發光微粒子免疫分析法檢測HBsAg及HBeAg的變化。結果從7種化學合成多肽中篩選出多肽KBDT-2,RT-PCR結果顯示,KBDT-2具有體外抗HBV復制作用,且藥物濃度越高,抑制效果越好;化學發光微粒子免疫分析法檢測顯示,KBDT-2對HBV生物學標志物HBsAg及HBeAg有抑制作用;結晶紫染色檢測結果顯示,KBDT-2對HepG 2.2.15無明顯毒性作用。結論KBDT-2具有抑制HBV復制作用,且無明顯細胞毒性,可以有效降低HBsAg、HBeAg表達,為探索抗HBV新型藥物提供了實驗數據支持。

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