一株永生化的BRCA1突變型人卵巢表面上皮細胞系的建立及初步分析

摘要：背景與目的:BRCA1突變女性患乳腺癌和卵巢癌的風險增加,然而,目前尚不清楚BRCA1的單個等位基因突變如何導致癌癥的發生,建立BRCA1突變的永生化細胞系可能為此類腫瘤發生的研究提供一個有用的模型。方法:從無錫市人民醫院收治的1例攜帶BRCA1單等位基因185delAG突變患者的正常卵巢組織中分離和建立了卵巢表面上皮細胞系OSE236;然后利用反轉錄病毒系統介導的技術,用特異的shRNA穩定沉默p53表達,并導入人端粒酶反轉錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)催化亞基和致癌基因HRAS,構建了系列細胞系并測定了其生長、衰老、細胞周期及致瘤特性。結果:成功建立了永生化細胞系OSE236/p53i/hTERT,但在該永生化細胞中導入致癌基因HRAS所構建的細胞系OSE236/p53i/hTERT/HRAS并未在體外和體內誘導腫瘤的轉化。對該系列細胞系進行研究發現,與原代細胞系OSE236相比,永生化細胞系OSE236/p53i/hTERT中的β-半乳糖苷酶活性明顯降低,而該BRCA1突變在所有系列細胞系中都存在,細胞周期隨永生化明顯增強,相關細胞周期調節蛋白(如CDK4、Cyclin B1/Cyclin D1/Cyclin E)上調,該永生化細胞系目前已在體外傳代超過100代。結論:盡管未能在體外和體內將該永生化細胞系轉化為癌細胞,但該攜帶BRCA1-185delAG突變的永生化人卵巢表面上皮細胞可能為研究BRCA1突變相關卵巢癌或乳腺癌提供了一個很有價值的細胞模型。