一株永生化的BRCA1突變型人卵巢表面上皮細(xì)胞系的建立及初步分析

摘要：背景與目的:BRCA1突變女性患乳腺癌和卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)增加,然而,目前尚不清楚BRCA1的單個(gè)等位基因突變?nèi)绾螌?dǎo)致癌癥的發(fā)生,建立BRCA1突變的永生化細(xì)胞系可能為此類(lèi)腫瘤發(fā)生的研究提供一個(gè)有用的模型。方法:從無(wú)錫市人民醫(yī)院收治的1例攜帶BRCA1單等位基因185delAG突變患者的正常卵巢組織中分離和建立了卵巢表面上皮細(xì)胞系OSE236;然后利用反轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)介導(dǎo)的技術(shù),用特異的shRNA穩(wěn)定沉默p53表達(dá),并導(dǎo)入人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)催化亞基和致癌基因HRAS,構(gòu)建了系列細(xì)胞系并測(cè)定了其生長(zhǎng)、衰老、細(xì)胞周期及致瘤特性。結(jié)果:成功建立了永生化細(xì)胞系OSE236/p53i/hTERT,但在該永生化細(xì)胞中導(dǎo)入致癌基因HRAS所構(gòu)建的細(xì)胞系OSE236/p53i/hTERT/HRAS并未在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤的轉(zhuǎn)化。對(duì)該系列細(xì)胞系進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),與原代細(xì)胞系OSE236相比,永生化細(xì)胞系OSE236/p53i/hTERT中的β-半乳糖苷酶活性明顯降低,而該BRCA1突變?cè)谒邢盗屑?xì)胞系中都存在,細(xì)胞周期隨永生化明顯增強(qiáng),相關(guān)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(如CDK4、Cyclin B1/Cyclin D1/Cyclin E)上調(diào),該永生化細(xì)胞系目前已在體外傳代超過(guò)100代。結(jié)論:盡管未能在體外和體內(nèi)將該永生化細(xì)胞系轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞,但該攜帶BRCA1-185delAG突變的永生化人卵巢表面上皮細(xì)胞可能為研究BRCA1突變相關(guān)卵巢癌或乳腺癌提供了一個(gè)很有價(jià)值的細(xì)胞模型。