摘要：目的:建立可用于評價動物源性生物材料細(xì)胞免疫的體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)方法。方法:采用C57小鼠脾臟淋巴細(xì)胞,通過淋巴細(xì)胞數(shù)量、陽性對照劑(刀豆蛋白A,Con A)濃度和培養(yǎng)時間等條件篩選,用CCK8試劑檢測細(xì)胞增殖率,初步優(yōu)化體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)方法。采用牛心包組織(原材料)的浸提液和勻漿液,作為抗原特異性的陽性對照組考察樣品前處理方式對試驗(yàn)體系的影響,并用流式細(xì)胞儀分析增殖后的淋巴細(xì)胞亞型百分比,考察樣品制備方式對淋巴細(xì)胞亞型增殖影響的差異。結(jié)果:本試驗(yàn)中小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖試驗(yàn)條件確定為每孔接種6×105個淋巴細(xì)胞,陽性對照孔Con A濃度為2.5μg·mL-1,培養(yǎng)時間為3 d。牛心包浸提液和勻漿液的淋巴細(xì)胞增殖率均約為細(xì)胞對照組的2倍,兩者的淋巴細(xì)胞亞型百分比變化不同于Con A組,未出現(xiàn)T細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞、CD8 T細(xì)胞百分比的增加。浸提液組與勻漿液組的活化NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞百分比與對照組相比均明顯升高,但浸提液組的升高幅度數(shù)倍高于勻漿液組,且僅浸提液組NK細(xì)胞百分比與對照相比出現(xiàn)了明顯倍增。結(jié)論:本研究建立了以動物組織(原材料)為抗原特異性陽性對照的體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)方法。動物組織(原材料)浸提和勻漿樣品均可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞增殖陽性結(jié)果,其促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的機(jī)理(亞型分類)不同于Con A等有絲分裂原,提示使用作為動物組織(原材料)陽性對照更能反映試驗(yàn)體系的敏感性。