小反芻獸疫病毒間接化學(xué)發(fā)光抗體檢測方法的建立與優(yōu)化

摘要：構(gòu)建了原核表達質(zhì)粒pET-28a-N,經(jīng)原核表達純化獲得小反芻獸疫病毒N蛋白。將純化的小反芻獸疫病毒N蛋白與對應(yīng)的酶標(biāo)二抗配對,通過對各個反應(yīng)條件的優(yōu)化建立了間接化學(xué)發(fā)光抗體檢測方法。通過對血清樣本的檢測,對該方法的敏感性、特異性、重復(fù)性、符合率進行了評價。試驗結(jié)果顯示:N蛋白最適包被濃度為0.5μg/mL,最適包被條件為4℃24 h;酶標(biāo)二抗最適工作濃度為1∶2000。特異性試驗證明,該方法與羊常見病毒的抗體陽性血清沒有交叉反應(yīng)。通過檢測大量小反芻獸疫病毒抗體陰、陽型血清,確定了科學(xué)的判定標(biāo)準(zhǔn)。