摘要：目的構建固醇調節(jié)元件結合蛋白1(SREBP1)啟動子雙熒光素酶報告基因表達載體,為研究針對SREBP1靶點的天然活性抑制劑篩選奠定基礎。方法利用生物信息學軟件,對SREBP1基因5′端上游5 000 bp序列進行啟動子預測與分析。應用Gibson Assembly方法構建啟動子雙熒光素酶載體,并將構建成功的pGL3-SREBP1-pro重組質粒和內參質粒p RL-SV40共轉染肝癌HepG2細胞并給予天然抑制劑大黃素,檢測SREBP1轉錄活性的抑制效果。結果 SREBP1基因5′端上游2 000 bp區(qū)域內有啟動子特征序列,存在轉錄因子結合位點;重組質粒經酶切及測序鑒定證實為陽性克隆,瞬時轉染肝癌HepG2細胞后經雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測,所克隆的片段序列具有啟動子活性,該活性可被大黃素所抑制。結論成功構建了pGL3-SREBP1-pro雙熒光素酶報告基因表達載體,并證實其活性,可為進一步用于針對SREBP1靶點的天然活性抑制劑篩選奠定基礎。