骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)小鼠肌源性干細(xì)胞造血分化初步研究

摘要：目的研究骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)對小鼠肌源性干細(xì)胞(MDSC)體外造血分化的影響并探討作用機(jī)制。方法選擇6~8周齡C57BL/6雄性小鼠4只;5 d齡C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度離心法獲取6~8周齡小鼠BMSC;同時利用混合酶消化聯(lián)合磁珠分選法分離5d齡小鼠后肢骨骼肌干細(xì)胞抗原1陽性(SCA-1^+)MDSC,建立以BMSC為飼養(yǎng)細(xì)胞的共培養(yǎng)體系。MDSC隨機(jī)分為3組,對照組為新鮮分離的MDSC,單培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組分別進(jìn)行單獨培養(yǎng)或與BMSC共培養(yǎng)7 d。采用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)法檢測SCA-1表達(dá);Western blot檢測造血相關(guān)分子CD34和CD45表達(dá),相對灰度法分析數(shù)據(jù);real-time RT-PCR檢測Wnt信號通路相關(guān)分子的轉(zhuǎn)錄水平,數(shù)據(jù)采用AACt相對定量法分析。結(jié)果富集的MDSC胞體小而圓,表達(dá)SCA-1;單培養(yǎng)組細(xì)胞貼壁生長,呈梭形或紡錘形,可形成多核肌管;共培養(yǎng)組除少量細(xì)胞貼壁生長外,可見大量小圓細(xì)胞懸浮生長;與對照組相比,單培養(yǎng)組CD34和CD45表達(dá)未見顯著變化,共培養(yǎng)組顯著提高,差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(CD34,t=9.068,P=0.010;CD45,t=4.860,P=0.018);在基因轉(zhuǎn)錄水平,與對照組比較,單培養(yǎng)組Wnt5a轉(zhuǎn)錄水平提高(t=7.395,P=0.018),共培養(yǎng)組Wnt2、Wnt3、CCND1和myc表達(dá)上調(diào)(Wnt2, t=4.964,P=0.008;Wnt3,t=9.513,P=0.010;CCND1,t=9.688,P=0.010;myc,t=7.985,P=0.005)。結(jié)論 MDSC單獨培養(yǎng)時以成肌分化為主;與BMSC共培養(yǎng)時發(fā)生造血分化,機(jī)制可能與激活經(jīng)典Wnt信號通路有關(guān)。