重組突變巴曲酶酶動力學及活性分析研究

摘要：目的對重組突變巴曲酶進行酶動力學初步研究,并建立一種蛇毒類凝血酶活性測定方法。方法使用可控溫(37℃)紫外分光光度計,采用酶動力學測定法,測定重組突變巴曲酶的米氏常數,優化活性測定方法的反應時間和線性范圍,驗證此方法精密度,并用發色底物法與血漿凝集法同時測定不同蛇種來源的類凝血酶活性。結果重組突變巴曲酶的米氏常數(37℃)Km值為256.28μmol/L、Vm值為0.005077μmol/min。該法呈現相應的劑量關系曲線,反應時間優選為0~20min,線性范圍優選為1~16.8nmol/L,擬合度R2≥0.99,方法精密度的變異系數≤5.0%。兩種不同方法測定不同蛇種來源類凝血酶的活性單位比例范圍為3.3~3.7(發色底物法/血漿凝集法),比例關系一致。結論建立的蛇毒類凝血酶活性測定方法擬合度優,精密度高,可測定不同來源的類凝血酶活性,并可替代傳統血漿凝集活性測定法。