野杏SSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化

摘要：為建立穩(wěn)定可靠的野杏SSR-PCR反應(yīng)體系,以3個(gè)野杏無性系170號(hào)、240號(hào)、263號(hào)和1個(gè)西伯利亞杏無性系508號(hào)為試驗(yàn)材料,采用L16(45)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)影響野杏SSR-PCR反應(yīng)的5個(gè)因素在4個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:各因素對(duì)反應(yīng)體系的影響由大到小依次為DNA模板濃度、引物、dNTP、Mg^2+、Taq聚合酶。野杏SSR-PCR最佳反應(yīng)體系(總體積20μL):dNTPs0.45mmol/L、Mg^2+2mmol/L、Taq酶1.125U、引物0.125μmol/L、DNA模板20ng。選用引物X128和60個(gè)野杏樣木對(duì)該體系進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證,擴(kuò)增產(chǎn)物集中在100~200bp,穩(wěn)定度高,多態(tài)性良好,該體系可應(yīng)用于野杏分子標(biāo)記輔助育種等方面的研究中。