山楂Actin基因片段克隆及序列分析

摘要：依據(jù)GenBank中已知的薔薇科梨屬Actin基因的保守序列設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,以山楂葉片總DNA和總RNA為模板,分別利用PCR和RT-PCR技術(shù)從山楂中克隆得到Actin基因的DN段和cDN段,測(cè)序得到山楂Actin基因DN段長度為1578bp,cDN段長度為1005bp,編碼334個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)軟件分析表明,該核苷酸序列與蘋果、梨、桃的Actin基因同源性較高,分別為98%,97%,95%,而編碼的氨基酸序列與蘋果、梨、桃則完全相同,屬間具有很好的保守性。試驗(yàn)克隆得到的基因?yàn)樯介獳ctin基因,命名為CpActin。進(jìn)化樹分析結(jié)果進(jìn)一步表明,該Actin序列與蘋果、梨、桃和草莓等親緣關(guān)系最近;半定量RT-PCR結(jié)果顯示,CpActin在山楂的葉片、花柱和花粉中能夠穩(wěn)定表達(dá),可作為山楂的內(nèi)參基因。