pGV141-ROCK2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)

摘要：目的：克隆人Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）基因,構(gòu)建pGV141-ROCK2真核表達(dá)載體,并觀察其在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC-C）中的表達(dá)。方法：以RT-PCR的方法獲得ROCK2基因的CDS區(qū),經(jīng)Xho I、Kpn I雙酶切后,連接到pGV141載體中;將構(gòu)建的pGV141-ROCK2真核表達(dá)載體,經(jīng)PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定后,將其轉(zhuǎn)染入HUVEC-C中;采用western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：PCR法、雙酶切法檢測(cè)到的目標(biāo)條帶與目的條帶大小一致,測(cè)序結(jié)果顯示重組質(zhì)粒中插入的ROCK2基因序列與Gen Bank編碼上的編碼區(qū)完全一致;與未轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的HUVEC-C比較,轉(zhuǎn)染pGV141-ROCK2載體的HUVECC中ROCK2蛋白的表達(dá)顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05）。結(jié)論：成功構(gòu)建pGV141-ROCK2真核表達(dá)載體,體外轉(zhuǎn)染入HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表達(dá)顯著增加。