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    多粘類芽孢桿菌纖維素酶基因bglA,bglB和EG在乳酸菌中的分泌表達

    劉原子; 王艷; 萬學(xué)瑞; 王川; 吳潤; 劉崗; 吳自祥 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院; 甘肅蘭州730070
    • 乳酸菌
    • 纖維素酶
    • 多粘類芽孢桿菌
    • 分泌型表達
    • 酶活測定

    摘要:通過PCR擴增獲得乳酸菌(Lactobacterium lactis MG1363)的usp45基因,將其克隆到乳酸菌(L.lactis)食品級表達載體pNZ8048中獲得分泌型表達載體pNZ-X;然后將多粘類芽孢桿菌(Bacillus polymyxa)β-葡萄糖苷酶基因bglA、bglB及內(nèi)切β-葡聚糖酶基因EG分別連接載體pNZ-X,獲得重組質(zhì)粒pNZ-X::bglA,pNZ-X::bglB和pNZ-X::EG,將3個質(zhì)粒電轉(zhuǎn)導(dǎo)入L.lactis NZ9000,得到重組乳酸菌L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglA、L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglB和L.lactis NZ9000/pNZ-X::EG,并測定分泌性表達的BglA,BglB和EG的酶活性。結(jié)果顯示:3個酶大小均在50kU;DNS法測定酶活力表明重組菌株的酶活力顯著低于多粘類芽孢桿菌的酶活力(P〈0.05),但具有一定的活性;剛果紅染色結(jié)果也表明重組乳酸菌分泌產(chǎn)生的酶可產(chǎn)生明顯的水解圈。試驗為重組纖維素酶在食品級菌株中重組表達提供了一種可行的方案,為秸稈的降解研究奠定了基礎(chǔ)。

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