人腫瘤抑素相關(guān)T21RGD肽的表達與純化

摘要：目的構(gòu)建引入RGD序列人腫瘤抑素相關(guān)21肽（T21RGD）-內(nèi)含肽-幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白融合表達載體，實現(xiàn)目的肽的幾丁質(zhì)珠親和層析一步純化。方法人工設計合成T21RGD肽基因，經(jīng)重組定向克隆插入到原核表達載體pTYB2，酶切和測序鑒定正確后轉(zhuǎn)化人大腸桿菌BL21（DE3），IPTG誘導其融合表達，對表達蛋白進行幾丁質(zhì)珠親和層析，DTF誘導柱上裂解以獲得T21RGD肽。經(jīng)Trcine—SDS—PAGE和反相高效液相色譜（RP—HPLC）對純化產(chǎn)物進行鑒定。結(jié)果質(zhì)粒酶切和測序結(jié)果顯示，含T21RGD肽基因按正確方向和序列插入質(zhì)粒，融合蛋白表達量達菌體蛋白總量的50％以上，Trcine—SDS—PAGE顯示了T21RGD肽目的條帶與預期相符，反相高效液相色譜測定峰純度達97％。結(jié)論成功構(gòu)建T21RGD肽融合表達載體，實現(xiàn)了融合蛋白在大腸桿菌中高效表達和T21RGD肽幾丁質(zhì)珠親和層析一步純化，為進一步研究T21RGD肽抗腫瘤活性和作用機制奠定基礎。