表達甲型H1N1流感病毒血凝素抗原的DNA疫苗構建及其免疫原性評價

摘要：目的構建表達甲型HIN1流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）抗原的DNA疫苗，并在小鼠中測試其免疫原性。方法運用人密碼子優化技術合成甲型HIN1流感病毒HA序列，并轉移至DNA疫苗載體，用Westernblotting檢測其表達效率。采用單純隨機抽樣方法把BALB／c小鼠分成DNA疫苗組和對照組。用DNA疫苗免疫疫苗組小鼠，免疫后取小鼠血清和脾細胞，分別用ELISA方法和酶聯免疫斑點試驗（ELISPOT）方法檢測血清中的特異性抗體應答和脾細胞中的特異性T細胞應答，最后用血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）試驗和假病毒中和試驗分別檢測血清中的HI抗體和中和抗體應答。采用t檢驗作兩組之間比較。結果所構建的DNA疫苗能夠高效表達HA蛋白。免疫小鼠后能有效誘導T細胞免疫應答[429．0±113．4斑點形成細胞（spot—forming cell，SFC）／10。脾細胞]，血清結合抗體滴度為16127．0±2698．0，HI抗體滴度為100．8±16．9，所有數據均顯著高于載體對照（分別為t=3．863，P=0．0042；t=5．734，P=0．0002；t=6．018，P=0．0001）。DNA疫苗能活化產生高水平的針對同源H1N1毒株的中和抗體，但不能活化產生針對異源H1N1毒株的中和抗體。結論本研究構建的DNA疫苗有較好的免疫原性，并能誘導一定水平的保護性抗體產生。