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牛諾如病毒和冠狀病毒雙重PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用
王文佳; 師志海; 蘭亞莉; 徐照學(xué) 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院制藥工程學(xué)院; 河南鄭州450046; 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所; 河南鄭州450002; 河南省畜禽繁育與營(yíng)養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 河南鄭州450002
- 牛諾如病毒
- 牛冠狀病毒
- 犢牛腹瀉
- 雙重聚合酶鏈反應(yīng)
摘要：為建立能同時(shí)檢測(cè)牛諾如病毒(BNoV)和牛冠狀病毒(BCoV)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)方法,根據(jù)BNoV和BCoV基因組的保守區(qū)域設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物,預(yù)期特異性擴(kuò)增BNoV和BCoV的片段大小分別為542 bp和896 bp。特異性檢測(cè)結(jié)果顯示,該方法能特異性擴(kuò)增BNoV和BCoV的目的條帶,未擴(kuò)增出其他犢牛腹瀉病毒性病原;BNoV和BCoV的最低檢測(cè)限分別為6.71×10^4 copies/μL和1.38×10^5 copies/μL。對(duì)采集自河南地區(qū)的127份犢牛腹瀉樣品的檢測(cè)結(jié)果顯示,BNoV的陽(yáng)性率為6.30%(8/127),BCoV的陽(yáng)性率為14.96%(19/127),與單項(xiàng)PCR檢測(cè)結(jié)果相一致。結(jié)果表明,建立的雙重PCR方法可用于BNoV和BCoV的檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查。
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